SnapGene6破解版是一款非常優秀的分子生物學軟件。該軟件為用戶提供了可視化、模擬、避免錯誤、自動記錄、擁有您的數據、轉換文件格式等不同的優勢，新的版本中增加了新功能和顯示選項，非常適合一些專業的人員來使用！

【功能特點】

　　一、想象

　　1、DNA可視化

　　查看DNA序列的多個視圖。

　　地圖 · 序列 · 酶 · 特征 · 引物 · 歷史

　　自定義酶位點，特征，引物，ORF，DNA顏色等的顯示。地圖可以是圓形或線性格式。

　　使用雙鏈模式查看酶位點，具有翻譯，引物和DNA顏色的特征。單鏈模式顯示具有彩色特征的緊湊概覽。

　　從一系列酶組中選擇。剪切網站可以顯示為數字或行，按名稱或頻率排序。

　　按名稱，位置，大小，顏色，方向性或類型對帶注釋的要素列表進行排序。復選框在緊湊或完全展開的顯示之間切換。

　　按名稱，長度，顏色，結合位點，方向性或解鏈溫度對雜交引物列表進行排序。復選框在緊湊或完全展開的顯示之間切換。

　　查看DNA構建體的自動生成的圖形歷史記錄。祖先序列可以作為單獨的文件恢復

　　2、大序列支持

　　瀏覽染色體大小序列。

　　查看 · 搜索 · 縮放

　　利用SnapGene的高效數據處理功能，掃描具有數千種注釋功能的大型DNA序列。

　　使用專有的MICA算法立即在染色體內找到序列。

　　使用多功能控件調整縮放系數和顯示區域。

　　3、蛋白質可視化

　　查看蛋白質序列的多個視圖。

　　地圖 · 序列 · 屬性 · 特征 · 歷史

　　自定義區域，站點，鍵和序列顏色的顯示。

　　使用具有相關特征的1-或3個字母的氨基酸代碼查看蛋白質序列。

　　查看蛋白質的分子量，消光系數，等電點和氨基酸組成。可以對蛋白質的選定部分進行相同的分析。

　　按名稱，位置，大小，顏色或類型對帶注釋的功能列表進行排序。復選框在緊湊或完全展開的顯示之間切換。

　　查看自動生成的蛋白質序列圖形歷史記錄。祖先蛋白質或DNA序列可以作為單獨的文件再生。

　　4、直觀的序列編輯

　　輕松編輯DNA和蛋白質序列。

　　標準編輯 · DNA結束

　　進行插入，刪除，替換和大小寫更改。復制并粘貼序列時，會自動傳輸功能。

　　編輯線性DNA序列的末端以添加或去除突出端或磷酸酯。

　　5、序列顏色編碼

　　將選定的DNA或氨基酸序列設置為十種顏色之一。

　　給兩條DNA鏈或蛋白質序列著色。顏色在Map和Sequence視圖中都可見。

　　6、特征注釋

　　自動注釋常用功能，或手動注釋新功能。

　　自動特征檢測 · 手動特征注釋

　　使用SnapGene廣泛的數據庫查找DNA序列中的常見特征。您選擇的其他功能可以添加到自定義數據庫中。

　　選擇DNA或蛋白質序列的一部分，并使用靈活的GenBank兼容控件注釋特征。

　　二、模擬

　　1、限制性站點指標

　　確認限制性網站適合克隆。

　　獨特性 · 甲基化敏感性 · 特殊性質

　　以粗體顯示獨特的限制性位點，或選擇自動定義的Unique Cutters或Unique 6+ Cutters酶組。

　　不要被愚弄，因為限制性位點被Dam，Dcm或EcoKI甲基化阻斷。SnapGene將自動用星號標記該站點。

　　利用工具提示來避免有問題的限制網站。

　　2、限制性克隆

　　可視化克隆過程的所有方面。

　　如果您已經考慮過程，則模擬只需幾秒鐘。如果克隆過程存在設計缺陷，則可以捕獲并糾正錯誤。

　　3、PCR

　　模擬標準PCR。

　　使用您自己的引物，或要求SnapGene自動設計引物。產品文件在其歷史記錄中存儲模板和引物。

　　4、重疊延伸PCR

　　通過重疊延伸PCR融合片段

　　最多可組裝八個碎片。選擇要連接的片段及其方向，SnapGene將設計引物。

　　5、引物定向誘變

　　使用誘變引物進行定點誘變。

　　選擇誘變引物，按下按鈕查看修飾的質粒。歷史顏色突出了突變。

　　6、網關®克隆

　　模擬網關® BP克隆或LR克隆，或兩者在同一時間。

　　為方便起見，提供了常見的供體向量和目的向量。選擇要組裝的片段，SnapGene將設計引物。

　　7、吉布森大會®

　　通過融合多達八個片段或通過將多達八個片段插入向量來模擬Gibson Assembly。Gibson Assembly是一種流行的無縫克隆方法。

　　選擇要融合的片段及其方向，SnapGene將設計引物。線性化的載體可以通過酶消化或反向PCR產生。

　　8、IN-FUSION ®克隆

　　通過在向量中插入最多八個片段來模擬Clontech的In-Fusion克隆。In-Fusion克隆是一種非常通用的方法，可用于創建無縫基因融合。

　　選擇要融合的片段及其方向，SnapGene將設計引物。線性化的載體可以通過酶消化或反向PCR產生。

　　9、TA和GC克隆

　　通過TA或GC克隆捕獲PCR產物。

　　選擇傳統的TA克隆或高效GC克隆。

　　為方便起見，提供了常見的TA克隆載體和Lucigen的GC克隆載體。

　　10、退火Oligos

　　退火兩個寡核苷酸形成雙鏈產物。

　　使用簡單的控件添加突出限制克隆。

【破解說明】

　　把crack中的SnapGene.exe復制到安裝目錄中，默認C：\ Program Files（x86）\ SnapGene，點擊替換目標中的文件

【使用教程】

　　限制性克隆的技巧

　　對于許多應用，常規限制性克隆仍然是最好的方法。一些簡單的技巧將有助于確保您的克隆順利進行。

　　1、一般技巧

　　首先，在程序的每一步都要小心。從長遠來看，這種方法可以節省時間。

　　確保DNA非常干凈。當制備載體或切除待插入的片段時，從約2μg的DNA開始。

　　每次酶促反應后，用旋轉柱純化DNA。在40-45μl的10mM Tris（pH8.5）中洗脫DNA，然后進行下一步反應。（在用凝膠純化DNA之前不需要使用旋轉柱。）

　　為了最大限度地提高效率，請盡量減少程序中的步驟數。例如，將鈍端片段克隆到鈍性載體位點（例如SmaI位點）比將其用Klenow或T4 DNA聚合酶鈍化的位點更好。

　　如有疑問，用凝膠純化DNA。更清潔的起始材料將產生更好的結果。

　　2、準備矢量

　　限制性克隆最常見的問題是在手術后恢復起始載體。該問題有兩個原因：載體的不完全消化，以及切割載體與其自身的重新連接。下面描述的技巧將最大限度地減少這些影響。

　　確保載體的消化完成。使用過量的限制酶（約20 U，2μgDNA），消化約4小時。如果載體需要用兩種具有不同最佳反應緩沖液的酶切割，則依次進行消化，并在其間進行旋轉柱純化。

　　消化載體（并且如果合適的話鈍化），用磷酸酶處理：在37℃下1小時處于5'突出端，或者如果DNA具有任何平末端或3'突出端則在50℃處理1小時。

　　用旋轉柱除去磷酸酶。通常不需要對載體進行凝膠純化，因為磷酸酶處理會使產生的任何額外DNA失活。

　　3、使用載體，確保消化和磷酸酶反應完成。徹底和反復地渦旋混合物，并且不允許任何液滴逃脫酶處理。在渦旋后短暫旋轉以確保管側沒有留下液滴是個好主意。

　　準備插入的片段

　　為了制備插入的片段，不完全消化不是一個嚴重的問題，因為片段的部分回收是可接受的。您可以使用相對較短的消化時間，對于雙重消化，您可以使用對一種或兩種酶來說不是最理想的反應緩沖液。

　　用凝膠純化插入的片段。除去除不需要的或不完全消化的DNA外，該方法還可去除酶和小分子。當用透照儀觀察DNA條帶時，不要使用312nm或更低的短波紫外線，因為DNA會受到嚴重損害。請改用360-365 nm紫外燈。

　　如果通過PCR產生插入的片段，則在進行任何限制性消化之前用凝膠或旋轉柱純化。如果您計劃將平末端PCR片段（用聚合酶如Pfu產生）克隆到磷酸酶處理的載體中，請確保您的PCR引物含有5'-磷酸。

　　結扎和轉化

　　使用磷酸酶處理的載體，進行對照連接，其中省略插入的片段。該對照連接應該產生非常少的轉化體，因為只有環狀DNA分子有效地轉化大腸桿菌，并且在不與磷酸化片段連接的情況下不能發生載體的再環化。

　　如果DNA僅有粘性末端，則在室溫下連接約1小時。如果DNA具有任何平端，則在室溫下連接約4小時并使用高濃度T4連接酶。

　　微量制作和診斷摘要

　　如果您使用插入的片段獲得了比用于對照連接的結扎更多的轉化體，那么您的克隆幾乎肯定會起作用，并且您通常只能制作3-4個小量制備物。

　　在執行小量制備的診斷限制摘要時，始終包括起始向量作為參考標準。